摘要
原理
食物中的有機物經酸氧化分解,使磷在酸性條件下與鉬酸銨結合生成磷鉬酸銨。
內容
此化合物經對苯二酚、亞硫酸鈉還原成蘭色化合物--鉬藍。用分光光度計在波長660nm處測定鉬藍的吸光值,以測定磷的含量。反應式為:
H3PO4+12(NH4)3MoO4+21HNO3→(NH4)3PO4·12MoO3+21NH4NO3+12H2O
2. 適用范圍
依據中華人民共和國國家標準:GB12393-90, 此方法適用于所有食品及保健品中磷元素含量的測定。
3. 儀器
722可見分光光度計
4. 試劑
(1) 硝酸(G.R), 高氯酸(G.R) 硫酸(A.R)
(2) 混合酸消化液:硝酸+高氯酸 按4+1混合
(3) 15%(V/V)硫酸溶液:取15ml硫酸緩慢加入到80ml水中,并定容至100ml。
(4) 5%(W/V)鉬酸銨溶液:取5g鉬酸銨,用15%硫酸溶液稀釋至100ml。
(5) 對苯二酚溶液:取0.5g對苯二酚于100ml水中,溶解后加一滴濃硫酸。
(6) 20%(W/V)亞硫酸鈉溶液(注:此溶液需在每次實驗前臨時配制):稱取一定量的亞硫酸鈉,用蒸餾水溶解即可。
(7) 標準質控物:豬肝粉(國家標準物質研究中心提供),質控物需室溫干燥保存。
(8) 國家標準物質中心提供:磷標準儲備溶液,濃度為1000μg/mL
(9) 標準中間液的配制:吸取1ml磷標準儲備溶液,然后移入100ml容量瓶中,用去離子水定容至100ml ,濃度為10mg/L
5. 操作步驟
5.1樣品消化:實驗操作需在無元素污染的環境中進行。準確稱取樣品干樣(0.3-0.7g左右),濕樣(1.0g左右),飲料等其他液體樣品 (1.0-2.0g左右),然后將其放入50ml消化管中, 加混酸15ml(油樣或含糖量高的食品可多加些酸),過夜。次日,將消化管放入消化爐中,消化開始時可將溫度調低(約130℃左右),然后逐步將溫度調高(最終調至240℃左右)進行消化,一直消化到樣品冒白煙液體變成無色或黃綠色為止。若樣品未消化完全可再加幾毫升混酸,直到消化完全。消化完后,待涼,再加5ml去離子水,繼續加熱,直到消化管中的液體約剩2ml左右,取下,放涼,然后轉移至10ml試管中,再用去離子水沖洗消化管2-3次,并最終定容至10ml。
樣品進行消化時,應同時做樣品空白消化。
5.2磷標準曲線:分別吸取標準儲備液1.0ml、3.0ml、5.0ml至20ml刻度試管中,然后依次加入2ml鉬酸銨溶液、1ml亞硫酸鈉溶液、1ml對苯二酚溶液,加蒸餾水定容至20ml,混勻,靜置30分鐘,在波長660nm處測定其吸光度,由此計算出回歸系數,利用回歸方程計算或繪制成校正曲線。
5.3測定:取樣品及空白液各2ml分別至20ml試管中,然后依次加入2ml鉬酸銨溶液、1ml亞硫酸鈉溶液、1ml對苯二酚溶液,加蒸餾水定容至20ml,混勻,靜置30分鐘,在波長660nm處測定其吸光度,并根據測出的吸光度在標準曲線上算得未知溶液中的磷含量。
6. 計算
X (mg/100g) = (C∕m )×(V1∕V2 )×100
式中:X----樣品中磷含量,mg/100g
C----由標準曲線及回歸方程算得樣品測定液中磷含量,mg
m---稱樣量 g
V1---消化液定溶總體積,ml
V2-測定用消化液的體積,ml
此元素最低檢出限為2μg
7. 注意事項
(1) 亞硫酸鈉溶液最好每次實驗前臨時配制,否則可能會使鉬藍溶液發生渾濁。
(2) 其次定容完后,靜置時間不亦過長,否則溶液顏色將會加深,其結果不準確。
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