摘要
索氏提取法對包含在組織內部的脂肪等不能完全提取出來,酸分解法常使磷脂分接而損失。而在一定的水分存在下,極性的甲醇及非極性的*混合溶液卻能有效地提取結合態(tài)脂類,如脂蛋白、蛋白脂等及磷脂,更為有效。
內容
索氏提取法對包含在組織內部的脂肪等不能完全提取出來,酸分解法常使磷脂分接而損失。而在一定的水分存在下,極性的甲醇及非極性的*混合溶液卻能有效地提取結合態(tài)脂類,如脂蛋白、蛋白脂等及磷脂,此法對于高水分生物試樣如鮮魚、蛋類等脂類的測定更為有效。
(1)原理
*-甲醇提取法的原理是將試樣分散于*-甲醇混合液中,于水浴上輕微沸騰,-甲醇混合液與一定的水分形成提取脂類的有效溶劑,在使試樣組織中結合態(tài)脂類游離出來的同時與磷脂等極性脂類的親合性增大,從而有效地提取出全部脂類。再經過濾,除去非脂成分,然后回收溶劑,對于殘留脂類要用石油醚提取,定量。
①具塞三角瓶
②電熱恒溫水浴:50~100℃
③提取裝置
④布氏漏斗
⑤具塞離心管
⑥離心機:3000r/min
(3)試劑
①*:97%(體積分數(shù))以上。
②甲醇:96%(體積分數(shù))以上。
③ *甲醇混合液:按2:1體積比混合。
④ 石油醚。
⑤ 無水硫酸鈉:以120~135℃干燥1~2h。
(4)操作步驟
①提取
準確稱取均勻樣品5g于具塞三角瓶內(高水分食品可加適量硅藻土使其分散),加入60mL*-甲醇混合液(對于干燥食品,可加入2~3mL水)。連接提取裝置,于650C水浴中,由輕微沸騰開始,加熱1h進行提取。
②回收溶劑
提取結束后,取下燒瓶用布氏漏斗過濾,并用*-甲醇混合液洗滌濾器,燒瓶及濾器中試樣殘渣,濾液、洗滌液一并收集于具塞三角瓶內,置65~700C水浴中回收溶劑,至燒瓶內物料呈濃稠態(tài),而不能使其干,然后冷卻。
③石油醚萃取、定量
用移液管加入25ml石油醚,然后加入15g無水硫酸鈉,立即加塞混搖1 min ,將醚層移入具塞離心沉淀管進行離心分離(3000r/min)5min.用10mL移液管加入迅速吸取離心管中澄清的石油醚10mL,于已稱量至恒量的干燥稱量瓶內,蒸發(fā)去除石油醚,于100~105℃烘箱中烘至恒量(約30 min )。
(5)結果計算
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