戴安P680型高效液相色譜儀（含自動進樣器）使用操作規(guī)程

1 按下穩(wěn)壓電源工作電源開關(guān)鍵至“ON”狀態(tài)。依次接通P680型輸液泵、ASI-100自動進樣器、柱溫箱、檢測器、電腦。
2更換蠕動泵清洗瓶中5%的甲醇(如果儀器經(jīng)常使用則建議每周更換兩次，如果儀器很少使用則每次使用前必須更換。)
3確認洗針瓶中的洗液是否太少，若太少,則需補充或更換。洗液一般為：50%的甲醇。
4 排泵內(nèi)氣泡
4.1擰松泵右側(cè)的快速清洗閥（反時針兩圈左右）。按下泵前面板右下方的“Purge”鍵, 排泵內(nèi)氣泡，儀器將以6.0 ml/min的速度自動快速清洗泵內(nèi)殘留的氣泡，5分鐘將自動停止。若想手動停止，則再按 “Purge”鍵，將停止清洗。
4.2 將每個需要使用的通道分別排完氣泡后，擰緊快速清洗閥(順時針擰緊，注意不要擰得過緊。)。
5系統(tǒng)聯(lián)機
5.1檢查確認密碼鑰匙已與計算機聯(lián)結(jié)，鼠標(biāo)左鍵雙擊桌面下方工具欄的“Chromeleon”圖標(biāo)，打開 [Chromeleon Server Monitor]，點擊[Start]，待變色龍圖標(biāo)變成灰色，并顯示Chromeleon Server is running idle時，關(guān)閉[Server Monitor]。
5.2 鼠標(biāo)左鍵雙擊桌面的“Chromeleon”圖標(biāo)。雙擊右邊方框中的HPLC-Graphics.pan, 點擊泵模塊下的“Settings”鍵，將跳出泵的設(shè)定窗口,設(shè)置完成后，按右下方的“Close”關(guān)閉該界面。點擊自動進樣器模塊下的“Settings”鍵，將跳出進樣器的設(shè)定窗口,設(shè)置完成后，按右下方的“Close”關(guān)閉該界面。點擊檢測器模塊下的“Settings”鍵，將跳出一個泵檢測器的設(shè)置窗口, 設(shè)置完成后，按右下方的“Close”關(guān)鍵該畫面。
6序列進樣
6.1新建一個程序文件
6.1.1依次點擊File/New，選中“Program File”后,進入程序編輯向?qū)Ы缑妗?br /> 6.1.2確認泵的工作方式（“Isocratic”等度分析、“Ramp”二元梯度分析、“Multi-Step Gradient”多元梯度分析）、合適的流動相通道及高/低壓極限和流速。
6.1.3自動進樣器的參數(shù)設(shè)置，每一個參數(shù)后面都有一個推薦值，一般不做改動。
6.1.4通道的選擇，設(shè)定采集一個樣時需要采集的時間段（Acquisition Time），也可以不從0分鐘開始采集，也就是前面一段時間不采集信號。
6.1.5紫外信號的具體設(shè)置，設(shè)定檢測波長，波長帶寬，參比波長，參比波長帶寬。一般設(shè)定帶寬為1 nm，設(shè)定參比波長為600 nm，參比波長的帶寬為1 nm。
6.1.6設(shè)定完成后瀏覽程序參數(shù)，編輯、修改不適合處，最后單擊工具欄中的“保存”按鈕，給新建的這個程序起一個名字，若要新建一個文件夾，可點右上方的新建文件夾，然后將這個程序文件放入其中。
6.2建立方法文件
6.2.1依次點擊File/New，選中“Method File”后,進入方法編輯向?qū)Ы缑妗７椒ㄎ募窃谶M完樣后采集到譜圖進行處理數(shù)據(jù)時需要用到的，所以現(xiàn)在不需要做任何改動。不能夠等譜圖出來之后再去建方法文件。最好將它和剛才建的程序文件放在同一個文件夾里。
6.3建立新序列文件
6.3.1依次點擊File/New，選中建序列文件“Sequence (using Wizard)”，后進入序列編輯向?qū)Ы缑妗?br /> .6.3.2設(shè)定樣品信息
6.3.2.1設(shè)定樣品名稱，如果待測樣品溶液名字一樣，只是序號是按順序遞加的，可以在方框的空白處輸入待測樣品溶液名，并通過右邊的三角箭頭使用“sample Number”,讓軟件自動加上一個序號。 Number of 為待測樣品溶液的個數(shù)。Injection per為每個待測樣品溶液需要進樣的次數(shù)。Start為第一個待測樣品溶液放在自動進樣器上的位置，如果所測的待測樣品溶液是按順序放在自動進樣器上的，則輸入第一個待測樣品溶液的位置，軟件會自動輸入以下各個待測樣品溶液的位置。Injection為進樣體積。
6.3.2.2設(shè)定好后，按左下方的“Apply”后，可將待測樣品溶液的信息在右方以列表的方式顯示出來。
6.3.3設(shè)定對照品信息
6.3.3.1同設(shè)定樣品信息。但有時候由于待測樣品太多，花的時候較長，為了防止保留時間漂移，峰面積有變化，消除系統(tǒng)的誤差等原因，需要采用間隔進樣的方式進樣。Variatio standards after each unknown意思為每進幾個標(biāo)準(zhǔn)溶液后進幾個待測溶液，再進個標(biāo)準(zhǔn)溶液后進幾個待測樣品溶液。
6.3.3.2設(shè)定好后，按左下方的“Apply”后，可將所有樣品溶液的信息在右方以列表的方式顯示出來，且標(biāo)準(zhǔn)溶液在前，待測樣品溶液在后。
6.4點擊圖標(biāo)進入瀏覽器“Browse”界面，找到編輯好的序列。在此界面可以對序列進行進一步的調(diào)整，增加或減少樣品；改變樣品名、樣品類型、進樣位置、進樣量、分析程序、積分方法等參數(shù)，修改后保存序列。
6.5序列進樣
6.5.1如果正在采集基線，則點工具欄中藍色小圓點，停止采集基線，將跳出如下窗口：提示您是否保存剛才正在采集的基線譜圖。如果要保存，則在“Save to sequence”前“√”后選擇一個保存路徑。通常是不保存的，則按右上方的“YES”鍵停止基線的采集。
6.5.2加入進樣序列：擊工具欄上“Start /stop Batch”（開始/停止批進樣）鍵，將跳出一個窗口，如果方框中有不需要做的序列（如果有，一般為上次未做完的序列），則選中后，點右邊的“Remove”鍵，將其移走。點右上方的“Add…”將需要進樣的序列加入列表中。點擊底下右方的“Ready Check”，檢查設(shè)置好的程序、方法、序列有沒有錯誤或儀器有沒有準(zhǔn)備好。如果顯示有紅色感嘆號圖標(biāo)，則說明有錯誤。下圖顯示的信息為需要占有多大電腦空間和需要用掉多少流動相，沒有其它錯誤信息。單擊“ok”，完成檢查。
6.5.3開始進樣：單擊“Start”，儀器將會自動根據(jù)軟件中設(shè)定的先后順序開始進樣，直至所有的樣品全部進樣。若軟件中相應(yīng)的位置上并沒有放置樣品瓶，儀器將會自動識別，并跳過該樣品進下一個樣品。當(dāng)?shù)谝粋€樣品進完后，將會等待第二個樣品進樣，這時候保留時間(Retention Time)顯示為0.00min。
7處理數(shù)據(jù)
7.1點擊控制面板上的“Browser”進入需要處理數(shù)據(jù)的序列。
7.2選擇定量方法點擊方法文件“測試方法.qnt”。
7.2.1基本設(shè)置“Genernal”含量的單位后面輸入最后的計算出來的量的單位，液相樣品一般為濃度單位，固體一般要算百分含量。
7.2.2積分參數(shù)設(shè)定 “Detection”：Minimum Area：設(shè)定最小峰面積，一般設(shè)置0.01～10之間。低于設(shè)定值的將不會積分；Valley To Valley On：設(shè)置從峰谷到峰的積分；Inhibit Integration On：設(shè)定不積分段從什么時候開始不積分，Inhibit Integration Off：設(shè)定不積分段從什么時候結(jié)束不積分（ON和OFF是成對使用的。）；Fronting sensitivity Factory： 前沿峰靈敏度因子，一般設(shè)為2～4為宜；Tailing sensitivity Factory：拖尾峰靈敏度因子，一般設(shè)為2～4為宜；Rider Threshold：肩峰值。設(shè)定為100%，兩分不開的峰垂直分開單獨積分。
7.2.3峰表（Peak Table）設(shè)置：在第一列中輸入標(biāo)樣的名字；在第二列在輸入相對應(yīng)的保留時間；在第三列中輸入一個正負范圍，一般在設(shè)置值≤保留時間的5%；第四列為定量標(biāo)準(zhǔn)，一般為外標(biāo)法（External）；第五列為定量類型，一般以面積來定量（Area）；第六列為校正類型a) 單點校正一般做樣都是單點校正，所以選第一項：過原點的直線（Linear），b) 線性校正如果要做線性的話，就要選第二項：帶截距的直線（Linear with Offset）。其它設(shè)置都不用改動。
7.2.4定量表（Amount Table）
7.2.4.1編輯列Edit Amount Column在表格的下方任何一位置點右鍵，選中“Edit Amount Column”,在“Assign standards on the”后面的下拉菜單中選擇“Name”， 右邊框中將會顯示有幾個標(biāo)樣。點擊左邊方框下的自動生成列“Auto Generate，a) 做線性的話就選擇第一項（..separate..），表明要生成五個不同的列。b) 做單標(biāo)定量的話選擇第二項（..single..），表明生成一個列。在“Amount”列中輸入標(biāo)樣的濃度。
7.2.5校正（Calibration）如果有一點誤差較大（偏離直線較遠），不想讓它參與校正。比如說第一個點不想要，則將對應(yīng)的“√”去掉，按確定即可。
7.2.6 保存剛才方法的更改。
8報告輸出：在“Browse”界面下，打開序列，雙擊需要處理的標(biāo)準(zhǔn)樣品文件，點擊菜單“View/Printer-Layout”，進入需要打印的界面：類似于Excel電子表格，分好幾頁顯示，第一頁為基本譜圖和數(shù)據(jù)（Integration）；第二頁為：單標(biāo)的校正曲線（Calibration current peak）,顯示的有：線性圖、相關(guān)系數(shù)（Corr….）、截距(offset)、斜率(slope)、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)；第三頁為：混標(biāo)的校正曲線（Calibration Batch）一般用不上；第四頁為：峰的分析。包括：基線噪音（Noise）、分離度（Resol.）、對稱性（Asym.）、理論塔板數(shù)（Plates）等；第五頁為：統(tǒng)計表（Summary）.一般都需要打印；第七頁為譜圖的重疊（Overlay print）。選擇合適的報告頁面，打印輸出。
9關(guān)機
9.1數(shù)據(jù)采集完畢后，在控制面板檢測器設(shè)定中，關(guān)燈，然后斷開儀器各部件的控制，關(guān)閉檢測器。
9.2按規(guī)定用適當(dāng)?shù)娜軇_洗色譜柱、管路、自動進樣器、進樣針。確保沖洗干凈后，關(guān)閉各部分電源。
9.3退出色譜工作站，關(guān)閉電腦。
10.注意事項
10.1 泵
10.1.1如果流動相中沒有電解質(zhì)（即緩沖鹽或酸等），最好用50%的甲醇沖洗約20～40分鐘后就直接用甲醇或乙腈沖洗流路約20～40分鐘。
10.1.2如果流動相中有電解質(zhì)，需要先用5%的甲醇沖洗色譜柱約60分鐘后，最好用50%的甲醇沖洗約20～40分鐘后，再用純甲醇或乙腈沖洗流路約20～40分鐘。
10.1.3放置了一天或以上的水相或含水相的流動相如需再用，需用微孔濾膜重新過濾。
10.1.4蠕動泵清洗瓶中的5%的甲醇要求每周至少換二次。若液相使用頻率不高，建議每天使用前更換，以免水長細菌損壞泵中各組件。
10.1.5為了保證P680的安全運行，必須設(shè)定高、低壓極限（一般安裝時已設(shè)置好）；
10.1.6流動相禁止使用氯仿、三氯（代）苯、亞甲基氯、四氫呋喃、甲苯等；慎重使用四氯化碳、乙醚、異丙醚、酮、甲基環(huán)己胺等，以免造成對柱塞密封圈的腐蝕。若需要使用正相系統(tǒng)分析樣品，需要另行安裝耐腐蝕的正相密封圈。
10.1.7擰松快速清洗閥時，不宜擰得過松。一般擰松2圈左右即可。擰得過松流動相容易從清洗閥部位流進泵頭中引起報警。
10.1.8使用快速清洗閥時，只能一個一個通道的排氣泡，不得將幾個通道同時按比例排氣泡，比例閥的快速切換易導(dǎo)致?lián)p壞。
10.1.9沒有配制脫氣機的，流動相一定要超聲脫氣。有脫氣機的，泵電源開啟后，等脫氣機停止工作后再進行泵的其它操作。
10.2自動進樣器
10.2.1自動進樣器建議用50%的甲醇洗針。
10.2.2每天使用自動進樣器進樣前都要按一下控制面板上的“wash”鍵，儀器會自動排除定量環(huán)和針中的殘留氣泡。
10.2.3每天洗針前要檢查一下洗針瓶中是否有洗液（50%甲醇）。
10.3 檢測器
10.3.1檢測器的紫外或可見燈在長期打開的情況下，一定要保證有溶液流經(jīng)檢測池。若不需要做樣，可設(shè)置一個較低的流速（如0.05ml/min）或關(guān)閉燈的電源。
10.3.2檢測器的燈一般是在流通池有溶液連續(xù)流動幾分鐘后才開的。如果流動池中有氣泡，則會提示漂移過大無法通過自檢和校正。
10.3.3檢測器的氘燈或鎢燈不要經(jīng)常開關(guān)，每開關(guān)一次燈的壽命約損失30小時。若儀器經(jīng)常使用，可幾天開關(guān)燈一次。
10.4 整個系統(tǒng)
10.4.1緩沖溶液與有機溶劑互相轉(zhuǎn)換前一定要用5%甲醇清洗泵，防止鹽在有機相中結(jié)晶損壞泵中各組件。
10.4.2緩沖溶液的濃度不能高于0.5 mol/L，pH范圍2～12，Cl-的濃度要小于0.1 mol/L（防止腐蝕流路）。
10.4.3儀器長時間不用，每個泵通道和整個流路一定要用甲醇沖洗后保存，以免結(jié)晶或造成污染。
10.4.4待測樣品或標(biāo)樣在流動相中一定要易溶，否則進樣后會結(jié)晶造成定量不準(zhǔn)確或堵塞色譜柱。
10.5軟件
10.5.1不要輕易地在windows窗口下刪除軟件所在根目錄或子目錄下的文件，以免造成軟件無法正常使用。
10.5.2儀器不使用時，密碼鑰匙不要經(jīng)常拆來拆去，容易導(dǎo)致密碼鑰匙損壞。
10.5.3采集紫外信號時，若分析物質(zhì)的最大波長已知，則盡量減少采集的通道個數(shù)，以免占用電腦的空間。
10.5.4軟件系統(tǒng)的配置（Server Configuration）在軟件安裝完成后，不要改動。